液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)因其特異性好、靈敏度高、能夠同時(shí)檢測(cè)多種待測(cè)物，而廣受臨床認(rèn)可。但是由于臨床樣本要進(jìn)行前處理，目的是為了將目標(biāo)分析物從生物基質(zhì)中有選擇性地分離出來，減少其他基質(zhì)組分的干擾，而目前樣品制備方法種類較多、步驟復(fù)雜且主要依賴人工操作，此環(huán)節(jié)也是整個(gè)質(zhì)譜檢測(cè)流程中耗時(shí)最長的一環(huán)。樣品前處理的方法選擇、方法開發(fā)以及標(biāo)準(zhǔn)化操作等方面存在一定難點(diǎn)，目前尚無相關(guān)專業(yè)領(lǐng)域指導(dǎo)文件。
2023年12月，由中國醫(yī)療保健國際交流促進(jìn)會(huì)基層檢驗(yàn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化分會(huì)、中國醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)專業(yè)委員會(huì)組織起草的《液相色譜‐串聯(lián)質(zhì)譜法臨床樣品前處理專家共識(shí)》正式發(fā)布，旨在為實(shí)驗(yàn)室方法建立提供指導(dǎo)，助力臨床質(zhì)譜檢測(cè)方法的研發(fā)規(guī)范發(fā)展。
本期目次
2023年第12期
出版日期：2023-12-06
作為多年深耕質(zhì)譜領(lǐng)域的IVD企業(yè)，華大吉比愛深度參與了《液相色譜‐串聯(lián)質(zhì)譜法臨床樣品前處理專家共識(shí)》的起草工作，參加多次共識(shí)研討會(huì)，攜手領(lǐng)域內(nèi)權(quán)威專家共同研討，為臨床質(zhì)譜推廣及規(guī)范化發(fā)展貢獻(xiàn)力量。
該共識(shí)主要從液相色譜‐串聯(lián)質(zhì)譜法臨床樣品前處理的關(guān)鍵要素“人機(jī)料法環(huán)”這5個(gè)環(huán)節(jié)給出13條建議，并對(duì)操作時(shí)重點(diǎn)注意事項(xiàng)和常見錯(cuò)誤、樣品前處理的評(píng)價(jià)給出詳細(xì)闡述。最后對(duì)自動(dòng)化發(fā)展給出建議：“目前，臨床實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的前處理需求、樣本量和經(jīng)濟(jì)成本等因素選擇合適的前處理設(shè)備，配備自動(dòng)化前處理設(shè)備，以方便樣品的前處理?！?/p>
建議1：樣品前處理技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過色譜質(zhì)譜原理、分析化學(xué)和藥物分析專業(yè)知識(shí)、儀器使用及維護(hù)、檢測(cè)項(xiàng)目、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（Standard Operating Procedure，SOP）等專項(xiàng)培訓(xùn)，考核合格方可上崗。
建議2：樣品前處理方法選擇與儀器的靈敏度相關(guān)。濃度低或者質(zhì)譜離子化效率低的化合物，建議采用衍生化的方法提高化合物的離子化效率，或采用靈敏度更高的質(zhì)譜儀器。
建議3：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測(cè)物的理化性質(zhì)、生理水平、檢測(cè)精密度、靈敏度等要求，選擇合適的前處理方式和檢測(cè)儀器，實(shí)現(xiàn)可接受的性能要求和臨床預(yù)期用途。
建議4：鑒于液質(zhì)系統(tǒng)對(duì)于所使用的常見試劑、流動(dòng)相化學(xué)級(jí)別和樣本的凈化程度要求較高，建議實(shí)驗(yàn)室使用HPLC或LC‐MS純度的試劑，并采用凈化程度較高的前處理方法，減少對(duì)液質(zhì)系統(tǒng)的損耗或污染。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)通量的要求，選擇經(jīng)濟(jì)高效的前處理設(shè)備（管式或板式）。
建議5：待測(cè)物濃度高且基質(zhì)成分簡(jiǎn)單的體液樣本（尿液、淚液、腦脊液等）推薦采用稀釋法。
建議6：對(duì)于含有豐富可溶性蛋白的血清、血漿和全血樣本，測(cè)定小分子化合物時(shí)推薦采用蛋白沉淀法。推薦采用酸、金屬鹽、有機(jī)溶劑等作為沉淀劑與樣本按一定比例混合，渦旋混勻，離心取上清后上機(jī)檢測(cè)。
建議7：根據(jù)待測(cè)物的不同理化性質(zhì)和極性特征，實(shí)驗(yàn)室可以采用適當(dāng)?shù)妮腿》绞綄?duì)待測(cè)物和基質(zhì)其它成分進(jìn)行分離，并綜合干擾物分離難度選擇合適的萃取載體，如從常規(guī)萃取（干血斑）、液液萃取、固液萃取到固相萃取，樣本的凈化能力遞增。
建議8：對(duì)于有磁珠法試劑盒的檢測(cè)項(xiàng)目而言，建議在經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證合格后采用。搭配全自動(dòng)樣本前處理系統(tǒng)，將極大地提高樣本前處理的自動(dòng)化水平。
建議9：在使用超濾法時(shí)，應(yīng)注意超濾的速率。超濾膜的孔徑應(yīng)該低于結(jié)合目標(biāo)化合物的蛋白質(zhì)的分子量，孔徑過大則雜質(zhì)過高，不能充分分離，孔徑過小則有效成分通透率較低，損失較大。超濾過程中，另外，應(yīng)控制超濾的條件和時(shí)間，如生理?xiàng)l件（37℃、pH7.4）和低至中等的離心力。
建議10：PH值和溫度對(duì)于結(jié)合態(tài)激素和游離激素的平衡至關(guān)重要，應(yīng)在合適的pH值和溫度下進(jìn)行透析操作。建議使用生化成分盡可能與血清/血漿離子環(huán)境接近的透析緩沖液。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)控制適當(dāng)?shù)木彌_液條件（如37℃、pH7.4）。
建議11：免疫親和提取中的親和柱需要平衡至室溫，再進(jìn)行樣本提取；對(duì)于超過親和柱載量的樣本，需要減少上樣體積進(jìn)行檢測(cè)。
建議12：衍生可以提高待測(cè)物穩(wěn)定性和分析靈敏度，但也有耗時(shí)耗力的劣勢(shì)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇合適的衍生試劑和條件，提高檢測(cè)效率。
建議13：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意前處理過程可能產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體、發(fā)熱、噪音等污染，配備良好的通風(fēng)、散熱或者隔音設(shè)備。有條件的實(shí)驗(yàn)室可以設(shè)置獨(dú)立的前處理區(qū)域，與儀器區(qū)分離開，降低對(duì)其它儀器和人員的干擾。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)環(huán)境中影響檢測(cè)結(jié)果的微生物污染、灰塵、電磁干擾、濕度、供電、溫度、聲音和振動(dòng)等進(jìn)行評(píng)估并設(shè)定相應(yīng)要求。
華大吉比愛質(zhì)譜研發(fā)團(tuán)隊(duì)多年來致力于推動(dòng)臨床質(zhì)譜前處理自動(dòng)化發(fā)展，團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)MSP-400已獲批上市。MSP-400能夠?qū)崿F(xiàn)樣本管進(jìn)、上機(jī)板出，省去人工實(shí)驗(yàn)的繁瑣重復(fù)操作，提高樣本前處理的穩(wěn)定性、降低總成本，全面提升質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)室整體工作效率。
MSP-400引領(lǐng)臨床質(zhì)譜前處理極簡(jiǎn)時(shí)代
MSP-400目前開展檢測(cè)項(xiàng)目
脂溶性維生素檢測(cè)
激素類檢測(cè)
兒茶酚胺及其代謝物檢測(cè)
膽汁酸譜檢測(cè)
藥物濃度監(jiān)測(cè)
。。。
未來可擴(kuò)展更多檢測(cè)項(xiàng)目